5-TAMRA-PEG4-Methyltetrazine 是一種結(jié)合了紅色熒光染料 5-TAMRA、四聚乙二醇（PEG4）和甲基四嗪（Methyltetrazine）的化合物，具有特殊的化學(xué)性質(zhì)和廣泛的應(yīng)用前景。以下是關(guān)于該化合物的詳細(xì)介紹：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成

1. 5-TAMRA（5-羧基四甲基羅丹明）：

• 經(jīng)典的紅色熒光染料，激發(fā)波長(zhǎng)約 555 nm，發(fā)射波長(zhǎng)約 580 nm。

• 具有高量子產(chǎn)率和良好的光穩(wěn)定性，適用于熒光標(biāo)記和成像。

• 紅色熒光可減少生物樣品自體熒光干擾，提高檢測(cè)靈敏度和信噪比。

2. PEG4（四聚乙二醇）：

• 親水性聚合物，增強(qiáng)化合物的水溶性，減少非特異性結(jié)合。

• 降低空間位阻，提高標(biāo)記效率，適配生物相容體系。

3. Methyltetrazine（甲基四嗪）：

• 具有特殊的反應(yīng)性質(zhì)，可通過(guò)逆電子需求 Diels-Alder 反應(yīng)（IEDDA）與反式環(huán)辛烯（TCO）快速結(jié)合。

• 反應(yīng)無(wú)需催化劑、條件溫和，適合活細(xì)胞及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

結(jié)構(gòu)式：

二、物理化學(xué)性質(zhì)

• 分子式：C??H??N?O?

• 分子量：775.86

• 外觀：紅色固體或粉末

• 溶解性：易溶于水及大部分有機(jī)溶劑（如 DMSO、DMF）

• 穩(wěn)定性：在 -20℃ 以下避光、干燥環(huán)境中穩(wěn)定保存，避免反復(fù)凍融。

三、核心特性

1. 高特異性標(biāo)記：

• IEDDA 反應(yīng)具有高選擇性和快速動(dòng)力學(xué)，可在復(fù)雜生物體系中實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的特異性標(biāo)記。

• 減少非特異性結(jié)合，提高成像信噪比。

2. 生物相容性：

• 在生理?xiàng)l件下穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞活性影響小，適用于活細(xì)胞成像和動(dòng)態(tài)追蹤。

• 低濃度下對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，適配體內(nèi)外各類紅色熒光點(diǎn)擊化學(xué)實(shí)驗(yàn)。

3. 高水溶性：

• PEG4 的親水特性提升分子水溶性，適配生物相容體系。

• 有機(jī)溶劑終濃度可控制在 3% 以下，更適合活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

4. 觸發(fā)式熒光標(biāo)記：

• 通過(guò)與 TCO 修飾的分子結(jié)合后顯現(xiàn)熒光，顯著降低背景噪聲。

四、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 生物分子標(biāo)記：

• 與蛋白質(zhì)、核酸等生物分子進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)熒光標(biāo)記和可視化檢測(cè)。

• 適用于抗體、多肽、蛋白的直接橙色熒光標(biāo)記。

2. 活細(xì)胞成像：

• 用于活細(xì)胞內(nèi) TCO 修飾蛋白/核酸的原位紅色快速成像。

• 追蹤細(xì)胞內(nèi)生物分子的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。

3. 體外標(biāo)記：

• 體外 TCO 修飾抗體/多肽的紅色熒光標(biāo)記。

• 生物分子相互作用的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)紅色熒光追蹤。

4. 點(diǎn)擊化學(xué)介導(dǎo)的免疫熒光染色：

• 通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與其他含有疊氮基團(tuán)的分子進(jìn)行偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)生物分子的標(biāo)記和富集。

5. 多通道熒光成像：

• 與綠色熒光染料（FITC、BODIPY FL）、近紅外熒光染料（Cy5、ICG）聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)三色甚至多色成像，無(wú)信號(hào)串?dāng)_。

五、儲(chǔ)存與使用注意事項(xiàng)

• 儲(chǔ)存條件：避光、干燥、-20℃ 以下環(huán)境保存，避免接觸強(qiáng)還原劑和強(qiáng)酸。

• 溶解建議：可溶于 DMSO、DMF 等有機(jī)溶劑，使用時(shí)稀釋于水性緩沖液（pH 6.0-8.5）。

• 使用注意：

• 避免頻繁解凍，建議現(xiàn)配現(xiàn)用。

• 保持產(chǎn)品干燥，避免陽(yáng)光直射。

• 未反應(yīng)的試劑可通過(guò)透析、洗滌、凝膠過(guò)濾層析去除。

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