DBCO-PEG4-Tetrazine 的制備主要基于點擊化學(xué)原理，通過 DBCO 基團與疊氮基團的反應(yīng)，或甲基四嗪基團與 TCO 官能化分子的反應(yīng)來實現(xiàn)，以下是具體制備方法：

1. DBCO 與疊氮基團的反應(yīng)：

• 原理：DBCO（二苯并環(huán)辛炔）是一種應(yīng)變促進的環(huán)辛炔基團，能夠與疊氮基團（N?）發(fā)生無銅點擊化學(xué)反應(yīng)（SPAAC），生成穩(wěn)定的三唑環(huán)結(jié)構(gòu)。

• 條件：該反應(yīng)在水中進行，反應(yīng)迅速而定量，適用于制備納偶聯(lián)物。反應(yīng)對 pH 不敏感，無需特殊緩沖液或控制 pH，在 4-11 的 pH 范圍內(nèi)效果好。

• 應(yīng)用：通過此反應(yīng)，可以將 DBCO-PEG4-Tetrazine 與疊氮化物修飾的生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）進行偶聯(lián)。

2. 甲基四嗪與 TCO 官能化分子的反應(yīng)：

• 原理：甲基四嗪是一種高反應(yīng)活性的四嗪衍生物，能夠與含有反式雙鍵的化合物（如反式環(huán)辛烯，TCO）發(fā)生快速的逆電子需求 Diels-Alder（IEDDA）反應(yīng)，生成穩(wěn)定的加合物。

• 條件：該反應(yīng)具有高度的選擇性和生物相容性，適用于活細胞和活體內(nèi)的標記和成像。甲基四嗪基團可以在中性或微堿性 pH 值下與伯胺反應(yīng)形成共價鍵。

• 應(yīng)用：通過此反應(yīng)，可以將 DBCO-PEG4-Tetrazine 與 TCO 官能化的分子進行偶聯(lián)，實現(xiàn)生物分子的標記和動態(tài)監(jiān)測。

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