NHS修飾96孔板的制備方法有哪些
2026-01-02
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NHS修飾96孔板的制備方法主要包括以下步驟,這些步驟基于共價(jià)結(jié)合原理,通過(guò)NHS與碳二亞胺(如EDC)聯(lián)用,活化孔板表面的羧基,進(jìn)而與目標(biāo)分子中的氨基發(fā)生反應(yīng),形成穩(wěn)定的酰胺鍵:
一、準(zhǔn)備階段
孔板選擇:選擇通常為聚苯乙烯或聚丙烯材質(zhì)的96孔板。
表面羧基化:若孔板表面無(wú)羧基,需通過(guò)等離子體處理、化學(xué)氧化或硅烷化等方法引入羧基。
清洗孔板:用去離子水或PBS緩沖液沖洗孔板,去除表面雜質(zhì)。
二、活化階段
配制EDC/NHS溶液:將EDC(如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺)和NHS按一定比例(如1:1)溶解在緩沖液(如MES,pH 4.5-6.0)中。
加入孔板:每孔加入適量EDC/NHS溶液,室溫孵育15-30分鐘,使羧基充分活化。
清洗孔板:棄去活化液,用緩沖液沖洗孔板,以去除未反應(yīng)的EDC和NHS。
三、固定階段
加入目標(biāo)分子溶液:加入含目標(biāo)分子(如抗體、蛋白質(zhì))的溶液,室溫孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜,使NHS酯與氨基反應(yīng)形成酰胺鍵。
清洗孔板:棄去固定液,用緩沖液沖洗孔板,以去除未結(jié)合的目標(biāo)分子。
四、封閉階段
加入封閉劑:加入封閉劑(如5% BSA或脫脂奶粉),室溫孵育1-2小時(shí),封閉未反應(yīng)的羧基,減少非特異性吸附。
清洗孔板:棄去封閉液,用緩沖液沖洗孔板,干燥后密封保存(通常4℃可保存數(shù)月)。
五、使用前預(yù)處理
使用前需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行預(yù)處理,如洗滌、孵育等。
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